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首頁 生化科研試劑 分子生物試劑及試劑盒 核酸分離與純化
PAGE凝膠銀染試劑盒
PAGE gel silver dye kits
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JD1227182312 PAGE凝膠銀染試劑盒 1L -- 1699元 現(xiàn)貨 3天
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性狀: 注:1L規(guī)格指可配制的硝酸銀染色液的體積,實際使用次數(shù)根據(jù)PAGE膠大小不同而不同。

 產(chǎn)品簡介:

核酸銀染的原理是銀離子可與核酸形成穩(wěn)定的復(fù)合物,然后用還原劑如甲醛在堿性環(huán)境下使Ag+還原成銀顆粒,可把核酸電泳帶染成黑褐色。它主要用于聚丙烯酰胺凝膠電泳染色。其靈敏度比EB高200倍,該產(chǎn)品整個過程只需要20分鐘,操作簡單,靈敏度高,能檢測到10ng以下的DNA條帶。
操作步驟:

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn): 一、染色液配制
需要配制的染色液體積根據(jù)PAGE膠的大小而定,一般的mini-PAGE膠需要20-30mL。配制用的器皿清洗干凈后用去離子水涮洗,染色液須用去離子水配制,現(xiàn)用現(xiàn)配。如果配制的溶液體積不是100mL,可以按比例改變各成分用量。
1,硝酸銀染液:稱取0.2g硝酸銀,加入到90ml去離子水中徹底溶解,加入10ml溶液A混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配。
2,顯色液:分別取溶液B和溶液C 各10ml加入80ml去離子水中混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配。
3,終止液:取終止液D 10ml加去離子水稀釋至100ml,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二、染色:
1,PAGE電泳結(jié)束后,將PAGE蛋白膠轉(zhuǎn)移至玻璃平皿或搪瓷盤中,用去離子水漂洗兩遍,每次2min。
2,將PAGE膠轉(zhuǎn)移至硝酸銀染液中,使染液沒過PAGE膠,室溫染色10min??芍糜趽u床上緩慢搖晃,使其染色均勻。
3,棄去染色液,用去離子水快速漂洗三次,每次半分鐘。
4,將PAGE膠轉(zhuǎn)移至顯色液中,使顯色液沒過PAGE膠,室溫?fù)u晃顯色至條帶清晰可見。
5,可選,將PAGE膠轉(zhuǎn)移至終止液中,終止顯色1min。
6,銀染后PAGE膠可拍照保存或用于后續(xù)試驗。
注意事項:
1.銀染主要出現(xiàn)在PAGE膠的表面,使用薄膠(0.5-0.75mm)可以提高靈敏度。
2.對于考馬斯亮藍(lán)染色的SDS-PAGE膠,可用甲醇將膠漂洗后,繼續(xù)進(jìn)行銀染??既具^程中的乙酸會干擾銀染,因此要確保將PAGE凝膠中殘留的乙酸徹底洗凈。
3.不同蛋白質(zhì)對銀染的反應(yīng)是不一樣的,尤其是堿性蛋白染色效果差。因此,不宜用銀染測定不同蛋白的比例。
4.染色過程中,緩慢的振蕩是必要的,一般選擇40-60 rpm.
5.凝膠表面的裂紋多是由于壓力、手印及表面干燥所致,所以全程中都應(yīng)帶手套操作。
6.PAGE凝膠背景呈均一的黑色多是水中的雜質(zhì)引起的,所以溶液的配制應(yīng)使用電導(dǎo)率小于1 μS的去離子水。
7.如果染色后有呈灰塵或煙霧狀灰色或棕色的沉淀出現(xiàn)在凝膠表面,可能是在幾步漂洗過程中洗得不夠徹底,或是染色過程時溫度太低。
8.較深的銀染背景多是丙烯酰胺中的雜質(zhì)所致。
9.PAGE膠中的甘油、尿素、甘氨酸、Triton X-100和兩性電解質(zhì)這些物質(zhì)會干擾銀染。
10.室溫操作時,溫度的波動往往會干擾銀染的效果,恒溫水浴可以解決這個問題。
11.憑借戊二醛預(yù)處理可以使各種蛋白質(zhì)的染色提高40倍。
12.染色使用的玻璃器皿必須非常干凈,用酸浸泡可以滿足要求。
13.銀染應(yīng)盡快照相,隨著時間延長,蛋白條帶會變淺,而背景會加深。
14.銀染容器最理想的是玻璃平皿,其次是搪瓷盤和密胺塑料盤等。
貯存: 室溫(15℃-25℃) 干燥保存,復(fù)檢期12個月。