4007787550
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| 貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 包裝 | 單價(jià) | 貨期 | 庫存 |
| JD1227173625 | DH5α感受態(tài)細(xì)胞 | -- | 10×100 μl | 264元 | 現(xiàn)貨 | 3天 |
| JD1227173624 | DH5α感受態(tài)細(xì)胞 | -- | 20×100μl | 462元 | 現(xiàn)貨 | 3天 |
| 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)： | 產(chǎn)品簡介： 本公司生產(chǎn)的DH5 α 感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌DH5 α 菌株經(jīng)特殊工藝制備得到，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19 質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 108，-70 ℃保存3-5 個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。 基因型: supE44 △lacU169 （φ80 lacZ△M15 ）hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1 特 點(diǎn): 一種用于鋪制與培養(yǎng)質(zhì)粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株。其 φ80 lacZ△M15 基因的產(chǎn)物可與pUC 載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)β 互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。 操作方法：（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行） 1 、將感受態(tài)細(xì)胞置于冰上融化，以下實(shí)驗(yàn)以 100ul 感受態(tài)細(xì)胞為例。 2 、向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入需轉(zhuǎn)化的目的 DNA，注意目的DNA的體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，冰浴放置30 分鐘。 3 、將離心管置于 42℃水浴中放置 60-90 秒，然后快速轉(zhuǎn)移到冰浴中放置 2-3 分鐘，注意不要搖動(dòng)離心管。 4 、向離心管中加入 500ul 無菌無抗的SOC 或LB培養(yǎng)基，37℃ 180rpm 振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)。目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。 5 、取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布含相應(yīng)抗生素的 SOC 或LB平板，37℃倒置培養(yǎng) 12-16 小時(shí)。涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整，如轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取100ul 左右的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板；反之，如轉(zhuǎn)化的 DNA總量較少，可取200-300ul 的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板。過多菌液可以抑制細(xì)菌生長。如果預(yù)計(jì)的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。涂布剩余的菌液可4 ℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新的平板。 注意事項(xiàng)： 1、感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70 ℃，不可反復(fù)凍融，否則其轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低。 2、實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)嚴(yán)格無菌操作，防止其它 DNA的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。 3、轉(zhuǎn)化時(shí)，轉(zhuǎn)化效率與外源 DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當(dāng)加入的外源DNA量過多或體積過大反而會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時(shí)DNA體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。 4、轉(zhuǎn)化率的計(jì)算：轉(zhuǎn)化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/ 鋪板DNA總量。 5、為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到最低。 |
| 貯存： | -70℃保存，運(yùn)輸為干冰包裝。自收貨之日起液氮保存至少一年，-70 ℃保存至少 6 個(gè)月。 |
