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本試劑盒適合于從血清、細胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因組，不適合于細胞等組織內RNA病毒基因組的提取。使用本試劑盒提取的基因組RNA可用于RT-PCR實驗。

操作步驟：

使用前請先在漂洗液中加入一瓶新開啟的無水乙醇，加入到離瓶口約0.5-1cm距離，蓋好搖勻。所有離心步驟均在2-8℃條件下進行。

1、  取病毒上清液0.5ml，12000rpm離心5min，盡量吸盡上清使用，棄去沉淀（如無沉淀可省去此步）。

2、  向病毒上清中加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K，充分混勻，65℃消化10min，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。

3、  吸附柱前處理：從包裝中取出吸附柱，放入收集管中，加入700ul 洗柱液，室溫放置2分鐘，2-8℃ 12000 rpm離心2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中待用。

4、  向病毒上清中加入500ul結合液，充分混勻。再向管中加入400ul無水乙醇，充分混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響RNA的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，靜置2min。（吸附柱的最大容積為750ul，可分兩次加入。一次吸附完離心后再將余下的混合液體加入柱中靜置離心。）

5、  12000rpm離心2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

6、  向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

7、  向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

8、  12000rpm離心2min，將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實驗如酶切、PCR等。

10、將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50ul-100ul經(jīng)65℃水浴預熱的RNase free ddH2O，室溫放置5min，12000rpm離心2min。即可得到高質量的病毒基因組RNA。

注意事項：

1、經(jīng)常更換新手套。因為皮膚經(jīng)常帶有細菌，可能導致RNase污染。使用無RNase的塑料制品和槍頭避免交叉污染。

2、樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的RNA提取量也下降。

3、若結合液中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解。

4、如果樣品消化不徹底，后面的離心步驟中可能會出現(xiàn)堵柱子的情況，可適當延長離心時間。

5、洗脫緩沖液的體積最好不少于50ul，體積過小會影響回收效率。

6、RNA產(chǎn)物應保存在-70℃，以防RNA降解。

7、RNA檢測：得到的基因組RNA片段的大小與病毒的保存條件和種類等因素有關。由于病毒不含有核糖體RNA，所以常規(guī)電泳無法檢測，只有后期實驗才可檢測到。D260值為1相當于大約40 μg/ml單鏈RNA。