| 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)： |
產(chǎn)品簡介：
本試劑盒采用可以高效、專一結(jié)合DNA的硅基質(zhì)材料和獨特的緩沖液系統(tǒng)，從聚丙烯酰胺凝膠上回收DNA片段，同時除去蛋白質(zhì)、其它有機化合物、無機鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)。使用本試劑盒回收的DNA可適用于后續(xù)各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR 、測序、文庫篩選、連接和轉(zhuǎn)化等實驗。操作步驟：
第一次使用前請先在15ml漂洗液中加入60ml無水乙醇，所有離心步驟均可使用臺式離心機在室溫下離心。
1 ．將單一的目的 DNA條帶從聚丙烯酰胺凝膠中切下（盡量切除多余部分），放入 1.5ml 離心管中，稱取重量，用研磨杵將膠盡量擠壓碎。加入 2 倍體積的溶液A 吹打混勻（每 100mg 膠加入200ul 溶液A），75℃水浴30分鐘。
2 ．用1ml 的去尖吸頭吸取混合物至過濾柱中（將膠一起吸入，溶液過多時可分次加入）。13,000rpm 離心1分鐘。將收集管中的濾出液轉(zhuǎn)入新離心管中。
3. 取六倍體積溶液 B 加入原離心管中（每 100mg 膠加入600ul），清洗管壁后加入過濾柱中(溶液過多時可分次加入)，顛倒過濾柱或輕輕吹打幾次混勻，13,000rpm 離心1 分鐘。將所有收集的濾出液混合。
4 ．將總濾出液混勻后加入吸附柱中（溶液過多時可分次加入），13,000rpm 離心30-60 秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放入收集管中。
5 ．向吸附柱中加入 600μl 漂洗液（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），13,000rpm 離心30-60 秒，倒掉廢液，將吸附柱重新放入收集管中。
6 ．向吸附柱中加入 600μl 漂洗液，13,000rpm 離心30-60 秒，倒掉廢液。
7 ．將離心吸附柱放回收集管中，13,000rpm 離心2 分鐘，盡量除去漂洗液。將吸附柱開蓋置于室溫 1-2 分鐘，徹底晾干，以防止殘留的漂洗液影響下一步的實驗。
8 ．將吸附柱放到一個干凈離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加適量 65–70℃預(yù)熱的洗脫緩沖液 20-30μ l ，室溫放置2 分鐘。13,000rpm 離心2 分鐘收集DNA溶液。注意：①為了增加回收效率，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，13,000rpm 再次離心1 分鐘。②洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于 20 μ l ，體積過小影響回收效率。③洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5 之間。
9 ．DNA回收產(chǎn)物直接后續(xù)實驗或者-20 ℃保存。
注意事項：
1 ．電泳時最好使用新的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果。
2 ．切膠時，紫外照射時間應(yīng)盡量短，以免對 DNA造成損傷。
3 ． 本試劑盒對<50bp DNA 片段回收效率偏低（30% 左右），如要回收，應(yīng)加大結(jié)合液的體積，延長吸附和洗脫的時間。
4 ．回收率與初始DNA量和洗脫體積有關(guān)，初始量越少、洗脫體積越小，回收率越低。 |
