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RNaseA ( 10mg/ml ) 1ml 
溶液Ⅰ 60ml
溶液Ⅱ 60ml 
溶液Ⅲ 80ml
漂洗液 2×15ml
洗脫液 30ml
吸附柱 10個
收集管(50ml) 10個
說明書 1份

       本試劑盒采用堿裂解法裂解細胞，根據離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結合溶液中的DNA的原理特異性提取質粒DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質材料能高效、專一地吸附DNA，可最大限度去除雜質蛋白及細胞中其他有機化合物，一般從50-100ml大腸桿菌LB培養(yǎng)液中，可快速提取200-300μg高純度高拷貝的質粒DNA，提取率達85-90%。 使用本試劑盒提取的質粒DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測序、連接和轉化等試驗。

注意事項：

1、溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的RNaseA 全部加入)，混勻，置于2-8℃保存。

2、第一次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在漂洗液中加入無水乙 醇配制成工作液(向15ml的漂洗液中加入60ml的無水乙醇。

3、使用前請先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現混濁，如有混濁現象 可在37℃水浴中加熱幾分鐘，待溶液恢復澄清后再使用。

4、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應立即蓋緊蓋子，如非指明，所有離心步驟均為使用臺式離心機室溫下進行離心。

5、如果是提取革蘭氏陽性菌質粒，必須在裂解細胞前破細胞壁，方法如下：收集適量菌體，加入5ml溶液Ⅰ，充分懸浮菌體，加入溶菌酶至終濃度為10-20mg/ml，37℃處理30min左右。加入溶菌酶的濃度和處理時間可根據不同的菌株和具體試驗條件進行調整。還可以選擇D1120、D1130革蘭氏陽性菌質粒提取試劑盒。

6. 洗脫緩沖液體積不應少于500ul，體積過小影響回收效率；洗脫液的pH值對洗脫效率也有影晌，若需要用水做洗脫液應保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調至此范圍)， pH值低于7. 0會降低洗脫效率。 DNA產物應保存在-20℃，以防DNA降解。

7. 如果所提質粒為低拷貝質粒或大于10kb的大質粒，應加大菌體使用量，使用400-800ml過夜培養(yǎng)物，同時按照比例增加溶液Ⅰ 、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量，吸附和洗脫時可以適當的延長時間，以增加提取效率。

8. DNA濃度及純度檢測：得到的質粒DNA純度與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關。 得到的DNA可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。 DNA應在OD260處有顯著吸收峰，OD260值為1相當于大約50μg/ml雙鏈DNA、 40μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應為1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因為pH值和離子存在會影響吸光值，但并不表示純度低。