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產(chǎn)品說(shuō)明：

       產(chǎn)品適用于處理新鮮的或已經(jīng)添加抗凝劑的血液樣品，采用異丙醇沉淀方法，操作簡(jiǎn)便，尤其適合大量提取血液基因組DNA。提取的DNA可用于PCR、酶切等常規(guī)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。少量樣本也可選購(gòu)我公司吸附柱型試劑盒（D1800 全血基因組DNA提取試劑盒）。

       本產(chǎn)品使用前請(qǐng)根據(jù)使用量將10×紅細(xì)胞裂解液用水稀釋成1×的即用型紅細(xì)胞裂解液。

處理血液量 1ml 5ml 10ml
紅細(xì)胞裂解液(1×) 5ml 25ml 50ml
白細(xì)胞裂解液 0.5ml 2.5ml  5ml
蛋白沉淀液 1ml 2.5ml 5ml
異丙醇 1ml 5ml 10ml
75%乙醇 1ml 5ml 10ml
DNA溶解液 100ul 0.5ml 1ml

操作步驟：

     以1ml全血為例

1、樣品的處理：在血液中加入3倍體積的1×紅細(xì)胞裂解液(請(qǐng)確認(rèn)已經(jīng)稀釋過(guò))，充分顛倒混勻，12000rpm離心1min(如為大量提取并且為大離心機(jī)，可11000轉(zhuǎn)離心5min)，小心吸去上清，再加入2倍體積的1×紅細(xì)胞裂解液，用移液器輕輕吹打沉淀，充分混勻，離心，棄上清，沉淀為白細(xì)胞。

2、向沉淀中加500ul白細(xì)胞裂解液，振蕩或者用移液器吹打至徹底混勻。65℃水浴10-20min，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次，直至溶液較為清澈看不見(jiàn)明顯細(xì)胞為止。

3、加入500ul蛋白沉淀液，充分顛倒混勻，此時(shí)會(huì)出現(xiàn)白色沉淀，65℃水浴5min，12000rpm離心5min，小心吸取上清(不要吸到下層沉淀或漂浮不溶物)，轉(zhuǎn)移到干凈離心管中，如還有沉淀物，可再次離心。

4、在上清中加入1ml異丙醇，混勻。12000rpm離心5min，可看到管底有少量白色DNA沉淀，棄掉上清。

5、向離心管中加入1ml 75%乙醇，12000rpm離心5min，棄去上清液?？稍俅味虝弘x心用移液器去除殘余上清。

6、將離心管敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，否則乙醇可能影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等。

7、向離心管中加入100-300ul DNA溶解液，室溫放置讓DNA自然溶解。如果DNA難于溶解，可室溫放置過(guò)夜或?qū)㈦x心管置于50-60℃水浴中水浴加熱5min。

注意事項(xiàng):

1、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA片段較小且提取量也下降。

2、若試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響提取效果。

3、DNA濃度及純度檢測(cè)：得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過(guò)程中的剪切力等因素有關(guān)?；厥盏玫降腄NA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰， OD260值為1相當(dāng)于大約 50 μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會(huì)偏低，因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響光吸收值，但并不表示純度低。