4007787550
摘 要 研究基因重組別藻藍(lán)蛋白(RAPC)的抑瘤作用，給皮下接種S180瘤細(xì)胞的小鼠，每天分別ig及ipRAPC13.4mg/kg，6.7mg/kg和3.4mg/kg，共10d，第11d處死小鼠，稱瘤重和胸腺重，計(jì)數(shù)白細(xì)胞。結(jié)果表明，RAPC對小鼠S180肉瘤有顯著抑制作用，瘤重抑制率在45%～64%之間，ig及ip均有效，對荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)和白細(xì)胞數(shù)量無明顯影響。
關(guān)鍵詞 基因重組別藻藍(lán)蛋白；S180肉瘤；白細(xì)胞；胸腺
Elementary Study of Recombinant Allophycocyanin(RAPC)
on S180 Tumor in Mice
Tang Shuming,Huang Fang,Dou Changgui,Zhuang Guixia，
Qin Song1,Wang Xihua1,Zhou Lihong1
(China Pharmaceutical University,Nanjing 210038；
1Institute of Oceano logy,the Chinese Academy of Sciences,Qingdao 266071)
Abstract The mice were infecfed by S180, then treated with Recombina nt Allophycocyanin(RAPC) ig or ip 13.4mg/kg,6.7mg/kg and 3.4mg/kg per day respectively for ten days.The animal were killed, tumor clot or thymus were wei ghed and the leukocyte were counted.The results sho wed that RAP C could decrease weight of tumor significatly.The inhibitory rate ranged from 45% to 64% and had no obvious effect on Thymus Index and leukocyte count.
Key Words RAPC(recombinant allophycocyanin), S180 tumor,WBC, Thymus.
藻膽蛋白(Phycobiliprotein)是某些藻類特有的重要蛋白質(zhì)，主要包括藻藍(lán)蛋白、藻紅蛋白和別藻藍(lán)蛋白三類，其抗癌、抗放射及促進(jìn)造血功能的作用，國內(nèi)外均有研究［1～4］。但從天然藻類提取、純化藻膽蛋白，工藝復(fù)雜，含量不穩(wěn)定。中國科學(xué)院海洋研究所與美國加州大學(xué)合作，成功地克隆了鈍頂螺旋藻(Spirulinaplatensis)別藻藍(lán)蛋白的基因，并通過構(gòu)成融合蛋白的方式，實(shí)現(xiàn)了在大腸桿菌中的高效表達(dá)，以此生產(chǎn)高純度別藻藍(lán)蛋白(Recombinant Allophycocyanin,RAPC)。本文用動物移植性腫瘤，研究RAPC的抑瘤作用。
1 材 料
1.1 藥物
基因重組別藻藍(lán)蛋白(RAPC)由中國科學(xué)海洋研究所秦松博士提供，系基因工程產(chǎn)品經(jīng)提取、純化的別藻藍(lán)蛋白水溶液，濃度0.67mg/ml，冰凍保存，臨用時(shí)解凍，以蒸餾水稀釋至所需濃度，小鼠灌胃或腹腔注射(以生理鹽水稀釋)容積均按體重為0.2ml/10g，劑量按預(yù)試驗(yàn)結(jié)果確定。環(huán)磷酰胺(CY)，上海第12制藥廠。
1.2 動物
ICR小鼠，18～20g，雄性，中國藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，合格證號：蘇動(質(zhì))字93021號。S180肉瘤瘤株移自江蘇省腫瘤研究所，本室傳代，在無菌操作下，每鼠右前腋窩部皮下接種瘤細(xì)胞懸液0.2ml(鏡檢含瘤細(xì)胞數(shù)9.23×107個(gè)/ml)。
2 方 法［5］
小鼠接種瘤細(xì)胞次日，按體重隨機(jī)分5組，每組10只，于接種后24h給藥。大、中、小3個(gè)劑量給藥組分別igRAPC13.4mg/kg，6.7mg/kg和3.4mg/kg。陽性對照igCY20mg/kg，空白對照組ig生理鹽水，均以0.2ml/10g等容積灌胃，連續(xù)10d。末次給藥后24h，小鼠稱重，眼眶取血，作白細(xì)胞計(jì)數(shù)；脫頸椎處死，剝?nèi)×鰤K，分離、摘取胸腺，電子天平稱濕重，計(jì)算瘤重抑制率和胸腺指數(shù)。
3 結(jié) 果
抑瘤作用及胸腺指數(shù)見表1、表2。
Tab l Effects of RAPC on tumor weigh tin mice
|
Groups |
Animal |
Dose(ig) |
Tumor we ight |
Inhibitory rate |
|
Control |
10 |
|
2.244±0.569 |
|
|
CY |
10 |
20.0×10 |
0.656±0.241*** |
70.8 |
|
RAPC |
10 |
13.4×10 |
0.895±0.372*** |
60.1 |
|
RAPC |
10 |
6.7×10 |
0.942±0.431*** |
58.0 |
|
RAPC |
10 |
3.4×10 |
1.216±0.422*** |
45.8 |
|
All data were analyzed by t-test compared to control ***P＜0.01 Tab 2 Effects of RAPC on Leukocyte count and Thymus Index in mice |
|
Groups |
Animal |
Dose |
WBC |
Thymus index |
|
Control |
10 |
|
8.7±1.32 |
2.67±0.68 |
|
CY |
10 |
20.0×10 |
6.2±0.46*** |
1.23±0.24*** |
|
RAPC |
10 |
6.7×10 |
9.4±1.43*** |
2.57±0.52* |
|
RAPC |
10 |
3.4×10 |
8.6±1.22*** |
2.35±0.46* |
|
Compared with control *P＞0.05, ***P＜0.01 另批實(shí)驗(yàn)， 采用腹腔注射給藥， 結(jié)果見表3。 Tab 3 Effects of RAPC on tumor weight tumor in mice |
|
Groups |
Animal |
Dose(ip) |
Tumor weight |
Inhibi tory rate |
|
Control |
10 |
|
2.314±0.526 |
|
|
CY |
10 |
20.0×10 |
0.581±0.234*** |
74.9 |
|
RAPC |
10 |
6.7×10 |
0.826±0.421*** |
64.3 |
|
RAPC |
10 |
3.4×10 |
1.182±0.483*** |
48.9 |
|
Compared with control ?***P＜0.01 由表1～3可見，RAPC對小鼠S180肉瘤有顯著抑制作用，劑量13.4mg/kg，6.7mg/kg和3.4mg/kg的瘤重抑制率分別在45%至64%之間，灌胃及腹腔給藥均有效，對荷瘤小鼠的白細(xì)胞數(shù)量和胸腺指數(shù)均無明顯影響。
4 結(jié) 語 中國生物工程中心“九五”攻關(guān)項(xiàng)目編號96-C02-04-03
作者單位：唐書明 黃芳 竇昌貴 莊桂霞（中國藥科大學(xué)海洋藥物中心，南京 |
